免疫性胶体金牌银牌细胞化学染色的固定剂选取

基本提醒:免疫性胶体金牌银牌染色和别的免疫性细胞化学措施一致,要想博得好的染色效果,关键在于标本管理是或不是适用,独有使抗原性及团伙结构保留免疫性胶体金牌银牌染色和其余免疫性细胞化学方法一致,要想得到好的染色效果,关键在于标本处理是还是不是妥贴,独有使抗原性及团队结构保留的好,手艺使现在的染色成功产生大概,其次要用Gott异性和高效价的一抗,接纳妥帖的稀释度。由于免疫性组化方法遍布应用于差异的生物学科,所要检出的抗体类别数见不鲜,性质也各不一致样。因而,不也许有一种适用于具备抗原的固定剂,而是依照区别的抗原性质分别对待。依据大家运用的固定剂介绍如下,供参谋。

骨干提醒:免疫性胶体金银染色和任何免疫性细胞化学方法同样,要想取得好的染色效果,关键取决于标本管理是不是合适,唯有使抗原性及集体结构保留免疫性胶体金牌银牌染色和别的免疫性细胞化学方法同样,要想赢得好的染色效果,关键取决于标本处理是还是不是妥善,独有使抗原性及团体结构保留的好,手艺使将来的染色成功产生也许,其次要用Gott异性和高效价的一抗,选取适用的稀释度。由于免疫性组化方法分布应用于差别的生物学科,所要检出的抗种类列多数,性质也各分歧样。因而,不也许有一种适用于具备抗原的固定剂,而是依据差别的抗体性质分别对待。依照大家应用的固定剂介绍如下,供参谋。 一、固定剂的取舍及定点时间 Karovsky's液pH7.3。 PAP液(Periodate—lysine–paraformaldehydefixative)各样抗原固定剂的挑三拣四及固定时间

着力提示:免疫性胶体金牌银牌染色和任何免疫性细胞化学措施一致,要想获得好的染色效果,关键在于标本管理是不是合适,只有使抗原性及集体结构保留免疫性胶体金牌银牌染色和其他免疫性细胞化学方法同样,要想获取好的染色效果,关键取决于标本管理是不是妥帖,独有使抗原性及团体结构保留的好,技巧使以往的染色成功造成恐怕,其次要用高特异性和高效价的一抗,选用极其的稀释度。由于免疫组化方法遍布应用于不一样的生物学科,所要检出的抗体体系好些个,性质也各不同。由此,不或许有一种适用于具有抗原的固定剂,而是依据分裂的抗原性质分别对待。根据我们应用的固定剂介绍如下,供参谋。 一、固定剂的选料及稳定期间 Karovsky's液pH7.3。 PAP液(Periodate—lysine–paraformaldehydefixative) 配制见附录一。 表5-9各个抗原固定剂的精选及定点时间

宗旨提示:1.恒定:最佳用4%的多聚乙醇固定液。对于冰冻切成块,甲缩醛固定有的时候比冰冻双酚A好;但对于区别的团协会和抗原,可选用分化的固定液

一、固定剂的选项及稳按期期

待检抗原

待检抗原

1.定位:最佳用4%的多聚乙醇固定液。对于冰冻切成片,乙醛固定一时比冰冻双酚A好;但对此差异的团伙和抗原,可选择分化的固定液。 有时候商品化的抗原会有相比相符而引入的固定液,请于购置前注意表明书。 Bouin S固定液:饱和苦味酸750ml,乙醛250ml,乙酸50ml,其对团队的穿透力较强,固定较好,结构整体,但因偏酸,对抗原有一定加害,且协会减弱显明,不适应组织标本的漫长保留。 PLP液:即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲缩醛,适于固定石蜡切条。适于包涵蛋白质协会,对超微结构及众多抗原的抗原性保存较好。 2.团组织脱水,透明:时间不能够太长,不然在切除时便于碎片,切不完整。 3.切丝时展片:某个组织在切除后麻烦在水中进行,那时可方便地在水中参加几滴异丙醇。 4.烤片:60℃ 30分钟或37℃ 住宿,温度太高或时刻太长,抗原轻便遗失。 5.蜡块及切成条的保存:最棒在4℃保存 6.脱片难题: Poly-L-Lysine为当下免疫性组化染色职业中最常用的一种防脱片剂,6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的职业液,适合于供给酶消化、微波、高温高压的防脱片管理。如不行,可用双重管理(APES和Poly-L-Lysine)的切块。在上述两种规格都于事无补的景色下,可用如下方法:切成片在脱蜡前,放在APES 1:50 丙酮溶液中浸润3分钟,自然的干,就可以实行下一步。 7.灭活内源性酶:HRP系统:3%双氧水灭活;AP系统:3%HAc灭活。 8.揭发抗原:对于石蜡切成条的免疫性组化实验时,必须利用高温加热抗原修复,那将有利于暴露抗原决定簇,进而扩大免疫性组化染色的强度。对于不一样的集团,分歧的抗体,分歧的抗体,所使用的措施应不一致等,可进展热修复、胰酶消化摄取、既不修复也不消化摄取。胶原还是可以用胃蛋白水解酶消食等。9.密闭:在湖羊血清密闭,非特异性染色如故较强时,可延长密封时间或用浓缩血清密封10.抗体稀释:应遵从“现用现配”的法规,对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。 11.背景高:在抗体浓度、反应时间、反应温度等适合的原则下,如若背景照旧高,可接纳含1‰ Tween20的PBS洗,极其是在显色从前要多洗。 12.返蓝:在苏木素复染后,可用中性(neutrality)缓冲液或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。 13.显色:必定要在显微镜下考查,注意调整背景。 14.在全部操作进程中,切成块千万不能干燥,不然会有非特异性染色。

Karovsky's 液pH7.3。

固定剂的类型

固定剂的项目

PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)

稳按期期

原则性时间

各类抗原固定剂的精选及确定地点时间

蛋白质

蛋白质

待检抗原

固定剂的门类

冷冻切成条不牢固,或用95%火酒,B5固定液

凝冻切成丝不稳定,或用95%二乙二醇,B5固定液

定位时间

10 min

10 min

蛋白质

激素

激素

冷冻切块,涂片,印片,不定点或环己酮,甲

凝冻切条,涂片,印片,不定点或丁酮,甲

结霜切成片不定点,或用95%甲醛,B5固定液

10 min

10 min

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